抗体是与感染和疾病作斗争的第一头免疫细胞。但是,除了自然使用外,生物化学已经设计了几种方法,可以修改这些抗体并用于检测实验室中的各种疾病并确定其他蛋白质的蛋白质结构。
制作重组抗体的是什么
抗体可以分为两种类型:单克隆和多克隆。单克隆抗体对特定抗原具有特异性(抗体的靶标),但多克隆抗体并非特定于任何抗原。重组是单克隆的,这是其生产中涉及的关键步骤。
重组抗体产生涉及使用重组DNA技术产生抗体。在这篇博客文章中,您将了解重组抗体生产,其实用程序及其优势的所有过程。
第一步:选择合适的抗原
靶标抗体与需要特定的抗体结合才能正常工作。当您设计抗体时,您必须确定最适合的抗原部分。蛋白质的形状,无论是抗原还是抗体具有明确的3D形状,这些形状将严格确定抗体是否将与其抗原紧密结合。因此,为了选择最合适的结合序列,您可能必须研究蛋白质的3D结构,然后仅正确选择结合位点。
第二步:创建重组的DNA序列
根据您想要抗体表达的特性,您必须创建合适的DNA序列。通常,在生物体中,DNA编码蛋白质,因此创建正确的DNA序列是创建功能性蛋白质的关键,在这种情况下,是一种功能性抗体。根据您希望表达的蛋白质的类型,您可以采用一种使用现有数据库搜索序列的生物信息学方法。
第三步:表达质粒结构
质粒是一小部分圆形DNA,具有使其对实验室工作非常有用的特性。
限制性核酸内切酶通常在研究中用于切割和粘贴质粒中的DNA序列。例如,如果您希望重组蛋白结合抗体并产生荧光染料,则必须切割并粘贴编码抗体识别和荧光蛋白表达的单个序列。一旦将它们插入宿主细胞,质粒就可以非常快地复制,这可能是细菌。
第四步:质粒的转染
将质粒插入细菌中,以便它可以快速繁殖并产生足够数量的所需抗体需要转染。将细菌细胞或任何宿主细胞兼容,使其很容易占用重组质粒DNA。通常,盐水用于提高交易过程的效率。
第五步:净化过程
创建抗体的最后一步是净化感兴趣抗体的净化过程。
重组抗体的使用
如前所述,重组抗体有几种用途,其中一些将在此处讨论。
用于诊断疾病
重组抗体的一种常见应用是ELISA测试,该试验用于检测像Covid这样的疾病。在这里,病人的样本嵌入了矩阵中。
然后将基质充斥着重组抗体,该抗体可以特异性地结合所测试的疾病的抗原。重组蛋白的另一端被编码为染料,因此,如果存在足够的抗原,则具有足够数量的抗体棒,染料的强度将表明该疾病。
在研究中使用
重组抗体被广泛用于研究工作。一种这样的应用称为印迹,它检测样品中特定蛋白质的存在。同样,这些抗体可用于检测组织中蛋白质的位置信息,这被称为免疫组织化学。
使用重组抗体的优点
与创建重组抗体有关,有很多优势。下面详细讨论了其中一些:
不用动物
产生多克隆抗体的通常技术涉及将仓鼠或兔子等动物注入抗原。注射后,动物的身体反应产生抗体。收集动物的血清以提取感兴趣的抗体。
对于单克隆抗体,将细胞从动物的脾脏中使用,最终会产生可以繁殖到癌细胞迅速的细胞。在上面提到的两种技术中,动物都以一种或另一种方式参与。但是,产生重组抗体不使用动物,这阻止了对它们的残酷行为。
快速生产
重组抗体的产生是一个快速的过程,扩大此类抗体的产生可能很快就会发生。
抗体的稳定性
重组抗体非常稳定,并且保留蛋白质结构的稳定性对于其正常运行至关重要。如果蛋白质暴露于非常高或非常低的温度或暴露于酶的情况下,它们就会很容易受损。
即使是重组抗体也会因极端温度而损害。但是,它们比实验室中使用的其他蛋白质更稳定。
最后一句话
创建抗体,无论是ABCAM单克隆抗体或重组需要专门的研究和努力。尽管如此,使这些抗体的时间和精力值得,因为它们在疾病检测,研究,血液打字等方面非常有用。此外,创造它们不会对动物造成伤害。与其他技术创建抗体相比,创建它们的时间更少,涉及的支出较少。